羅甸小米核桃葉綠素含量測定過程中的一些問題探討

葉綠素是植物葉片進(jìn)行光合作用最重要的物質(zhì)之一,其素含量是反映植物光合作用能力的重要指標(biāo)。針對葉綠素含量測定,國內(nèi)外進(jìn)行了諸多相關(guān)的研究，如用丙酮法提取葉綠素、葉綠素測量儀測量法、用二甲基亞砜直接浸提植物葉片葉綠素等等。每種方法都有其各自的優(yōu)缺點(diǎn)，但是在實(shí)際應(yīng)用中，現(xiàn)階段最多的使用葉綠素測量儀進(jìn)行測定，因?yàn)樵摲椒ㄗ羁旖莺唵巍６�且精確度極高。

運(yùn)用Arnon過濾法所測定的葉綠素含量與其他方法相比差別很大,主要原因可能是Arnon法測定葉綠素含量時(shí)需要過濾,過濾過程造成了葉綠素含量的部分損失。Arnon離心法相對于Arnon過濾法效率稍高。浸提法測定葉綠素含量的效率排序依次為: 80%丙酮浸提法<95%乙醇浸提法<三混液浸提法<雙混液浸提法。

另外，隨著乙醇在混合液中比例的增大,協(xié)同作用隨之增大,乙醇與丙酮的比例達(dá)到1∶1時(shí)含量達(dá)到最大;隨后繼續(xù)往丙酮中加入乙醇,協(xié)同作用開始變小。可見,當(dāng)乙醇與丙酮的比例達(dá)到1∶1時(shí),對羅甸小米核桃葉綠素的浸提最充分。通過不同配比協(xié)同作用試驗(yàn)表明,當(dāng)無水乙醇與無水丙酮比例為1∶1時(shí)浸提量最大,所以,單因素試驗(yàn)采用上述溶液為試驗(yàn)浸提溶液。在葉綠素浸提相關(guān)文獻(xiàn)中,提出了浸提溫度、浸提時(shí)間和浸提料液比這3個(gè)對葉綠素浸提影響最主要的因素。在相同浸提溫度和浸提料液比的情況下,當(dāng)浸提時(shí)間從2 h增加到5 h時(shí),羅甸小米核桃葉綠素含量逐漸升高,并在5 h時(shí)達(dá)到最大,然后隨著浸提時(shí)間繼續(xù)增加,葉綠素含量則不斷下降。這說明葉綠素最適浸提時(shí)間為5 h,不足或超過5 h,葉綠素的提取是不充分的。這是由于在浸提開始后,葉綠素有一個(gè)由組織向外擴(kuò)散的過程,因此提取出的葉綠素不斷增加。當(dāng)浸提時(shí)間為5 h時(shí),組織中葉綠素向提取溶劑的擴(kuò)散作用達(dá)到平衡,溶液中葉綠素含量達(dá)到最高。浸提時(shí)間超過5h后,溶液中葉綠素含量開始下降。其可能原因是隨著浸提時(shí)間的增長,羅甸小米核桃葉綠素暴漏在光線下的時(shí)間也就越長,對光的不穩(wěn)定性造成葉綠素含量不斷下降。